外泌體形成是由細胞膜內陷，形成內體，再形成多泡體，之后分泌到胞外。外泌體中攜帶有母細胞的多種蛋白質、脂類、DNA 和 RNA 等重要信息，而非編碼 RNA（包括 miRNA、lncRNA、circRNA 等）在調控基因表達等方面有著重要作用，對外泌體中的 miRNA、lncRNA、circRNA 進行研究不僅能夠深入了解疾病或不同發育階段的內在機制，而且篩選外泌體特異 biomarker 也有著非常高的臨床應用價值。隨著液態活檢及體外診斷技術的不斷發展，外泌體正在成為較新的疾病診斷標志物。

有關外泌體分泌和攝取及其組成、“運載物”和相應功能的高精度分子機制近些年剛剛開始受到關注，與外泌體相關的被 pubmed 收錄的文章數量（圖 1) 和國自然基金項目中標數量及資助金額逐年增長（圖 2），表明國內外對外泌體的研究興趣日益增長。今天小編就跟大家分享新鮮出爐的兩篇外泌體相關研究（IF>10）。

M2 巨噬細胞來源的外泌體通過向腫瘤細胞轉移 αMβ2 整合素促進肝癌轉移

M2 macrophage-derived exosomes facilitate hepatocarcinoma metastasis by transferring αMβ2 integrin to tumor cells

期刊：Original

影響因子：14.679

發表日期：2020 年 6 月 28 日

單位：南京醫科大學第一附屬醫院、東南大學

摘要：肝細胞癌（HCC）的發展和進展取決于其局部微環境。腫瘤相關巨噬細胞（TAM）被認為是腫瘤微環境的關鍵因素并且歸因于腫瘤侵襲性。然而，TAMs 對 HCC 的促轉移作用的詳細機制仍未確定。本研究表明 TAM 富含 HCC。TAM 的特征在于 M2 極化表型和體外和體內加速 HCC 細胞的遷移潛力。此外，我們還發現 M2 衍生外泌體誘導了 TAM 介導的促移動活性。通過質譜分析，我們發現整合素 αMβ2（CD11b/CD18）在 M2 巨噬細胞衍生的外泌體（M2-exos）中具有顯著的特異性和有效性。阻斷 CD11b 和 / 或 CD18 引起 M2-exos 介導的 HCC 細胞轉移的顯著降低。從機制上說，M2-exos 介導 CD11b/CD18 的細胞間轉移，激活受體 HCC 細胞中的 MMP- 9 信號傳導途徑以支持腫瘤遷移。總之，外泌體介導的功能性 CD11b/CD18 蛋白從 TAMs 轉移到腫瘤細胞可能具有促進 HCC 細胞遷移潛力的潛力，從而為腫瘤轉移機制提供新的見解。

肝癌細胞來源的外泌體 circUHRF1 誘導自然殺傷細胞衰竭并可能對肝細胞癌抗 PD1 治療產生耐藥性

Cancer cell-derived exosomal circUHRF1 induces natural killer cell exhaustion and may cause resistance to anti-PD1 therapy in hepatocellular carcinoma

期刊：Molecular Cancer

影響因子：15.302

發表日期：2020 年 6 月 29 日

單位：復旦大學附屬中山醫院

摘要：自然殺傷（NK) 細胞在天然抗腫瘤免疫反應中起著至關重要的作用，近年來，NK 細胞功能障礙已在包括肝細胞癌（HCC) 在內的各種惡性腫瘤中得到證實）。然而，NK 細胞功能障礙在人肝癌中的分子生物學機制尚不清楚。本研究用 qRT-PCR 檢測肝癌組織、外泌體和細胞系中 PHD 和環指結構域 1RNA(circUHRF1) 的環狀泛素樣表達。使用超速離心法和 ExoQuick 外泌體沉淀溶液試劑盒從 HCC 細胞和 HCC 患者血漿的培養基中分離外泌體，然后用透射電鏡、粒徑和 westernblot 進行表征。通過 ELISA 評估 circUHRF1 在 NK 細胞功能障礙中的作用。進行體內 circRNA 沉淀，RNA 免疫沉淀和熒光素酶報告基因實驗以探索 circUHRF1 在 NK 細胞中的分子機制，確定了 circUHRF1 在 HCC 組織中的臨床特征和預后意義。研究發現 circUHRF1 水平升高表明 HCC 患者臨床預后不良和 NK 細胞功能障礙。在 HCC 患者血漿中，circUHRF1 主要由 HCC 細胞以外泌體方式分泌，并且 circUHRF1 抑制 NK 細胞衍生的 IFN- γ 和 TNF- α 分泌。高水平的血漿外泌體 circUHRF1 與 NK 細胞比例降低和 NK 細胞腫瘤浸潤減少有關。此外，circUHRF1 通過降解 miR-449c-5p 上調 TIM- 3 的表達來抑制 NK 細胞功能，研究證明 circUHRF1 可能驅動肝癌患者抗 PD1 免疫治療的耐藥性，并為 HCC 患者提供潛在的治療策略。

今天介紹的兩篇文章都是從分子機制方向展開研究，外泌體研究主要有三大思路，表達譜、分子標志物及分子機制方向。這三類研究均依托高通量測序揭示外泌體攜帶 RNA 分子對細胞功能造成影響。機制方向比較特殊，一種思路是直接研究差異外泌體 RNA 對細胞造成影響及分子功能；而另一種思路是將外泌體與研究細胞共培養后，對共培養及單獨培養細胞進行測序，從而找到外泌體具體作用目的細胞靶基因。

Shbio Human circRNA array V1.0

Agilent Human miRNA array V21.0

Affymetrix  Human  miRNA 4.0 Array