国产精品网红尤物福利在线观看_欧美经典一区二区_辽宁老熟女高潮狂叫视频_日日草日日干_成人免费观看毛片_久久激情免费视频

伯豪生物
單細(xì)胞 TCR/BCR 測(cè)序
 電子資料 調(diào)研問(wèn)卷
伯豪生物新官網(wǎng)消息

技術(shù)簡(jiǎn)介

免疫組庫(kù)(Immune Repertoire,IR)是指機(jī)體內(nèi) T 淋巴細(xì)胞和 B 淋巴細(xì)胞多樣性的總和,反映機(jī)體免疫系統(tǒng)在特定時(shí)間段內(nèi)應(yīng)對(duì)外界刺激應(yīng)答的能力?;?10X Genomics 的單細(xì)胞系統(tǒng),可實(shí)現(xiàn)高通量的單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組和 V(D)J 測(cè)序。不但可以將 TCR/BCR 雙鏈匹配,而且能夠同時(shí)獲得基因表達(dá)信息。

技術(shù)原理

10X Genomic 單細(xì)胞免疫組庫(kù)測(cè)序與單細(xì)胞 RNA 測(cè)序一樣,通過(guò)微流控系統(tǒng)將帶有條形碼和引物的凝膠珠與單個(gè)細(xì)胞包裹在油滴中;接下來(lái)在每個(gè)油滴內(nèi),凝膠珠溶解,細(xì)胞裂解釋放 mRNA,通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生帶有 10X barcode 和 UMI 信息的 cDNA。破油(Breaking Emulsions)之后,cDNA 一分為二,后續(xù)同時(shí)進(jìn)行基因表達(dá)和免疫組庫(kù)的文庫(kù)構(gòu)建。其中 TCR 或者 BCR 的 V(D)J 序列通過(guò)設(shè)計(jì)在 C 區(qū)的巢式引物進(jìn)行 PCR 富集;而 mRNA 的信息,與 10X Genomics 3’mRNA 文庫(kù)不同,保留的是 5’端的信息。測(cè)序后即可一次性獲得大量單細(xì)胞的基因表達(dá)和免疫組庫(kù)數(shù)據(jù)。

?圖 5’mRNA 與 TCR/BCR 同時(shí)建庫(kù)

圖 5’mRNA 與 TCR/BCR 同時(shí)建庫(kù)

?

伯豪優(yōu)勢(shì)


1、通量高:一張芯片具有 8 個(gè)獨(dú)立的通道,可供 8 個(gè)樣本同時(shí)上機(jī),每個(gè)通道可捕獲 10000 個(gè)細(xì)胞。

2、分辨率高:可獲得真正單細(xì)胞水平的的免疫組庫(kù)信息,并且可匹配 TCR/BCR 的雙鏈。

3、信息豐富:可同時(shí)獲得單個(gè)細(xì)胞匹配的 mRNA 和 TCR/BCR 信息。


文庫(kù)結(jié)構(gòu)

5’gene expression 文庫(kù)

5’gene expression 文庫(kù)構(gòu)建單細(xì)胞測(cè)序

圖 10X Genomics 5’gene expression 文庫(kù)示意圖

?

V(D)J 文庫(kù)

V(D)J 文庫(kù)

圖 10X Genomics V(D)J 文庫(kù)示意圖

?

建議測(cè)序深度及參數(shù)

指標(biāo)

參數(shù)

測(cè)序深度 -5’mRNA

50,000~100,000 reads/cell

測(cè)序深度 -TCR/BCR

5,000~10,000 reads/cell

測(cè)序類型

PE150

樣本要求

1、類型:新鮮組織,原代細(xì)胞,細(xì)胞系等。

2、來(lái)源:血液提取、磁珠富集、流式富集、組織解離等。

3、樣本量及其它質(zhì)控要求:

樣本類型 要求
細(xì)胞懸液 > 10* 目標(biāo)細(xì)胞個(gè)數(shù)(底限 10,000 個(gè)細(xì)胞);
? 活率 >80%;
濃度 500-1,000 個(gè)細(xì)胞 /ul;
細(xì)胞間無(wú)粘連(成團(tuán)率 <5%);
無(wú)大于 40um 的細(xì)胞碎片或其他顆粒物;
不存在逆轉(zhuǎn)錄抑制劑和非細(xì)胞的核酸分子。
血液 EDTA 抗凝的全血(不可肝素抗凝),>5ml。
組織 0.3cm × 0.3cm(不超過(guò) 0.5 × 0.5cm)的新鮮組織,4~5 塊。


4、樣本的保存與運(yùn)輸


樣本類型 要求
細(xì)胞懸液 建議現(xiàn)場(chǎng)制備,如要運(yùn)輸,建議使用伯豪生物自主研發(fā)的單細(xì)胞保護(hù)液,4°C 運(yùn)輸,48 小時(shí)內(nèi)送達(dá)伯豪生物實(shí)驗(yàn)室。
血液 EDTA 抗凝的全血,4°C 運(yùn)輸,2 小時(shí)內(nèi)送達(dá)伯豪生物實(shí)驗(yàn)室;或提取 PBMC 后凍存,干冰運(yùn)輸。
組織 建議使用伯豪生物自主研發(fā)的單細(xì)胞組織保護(hù)液,4°C 運(yùn)輸,48 小時(shí)內(nèi)送達(dá)伯豪生物實(shí)驗(yàn)室。

應(yīng)用領(lǐng)域

1、腫瘤微環(huán)境;

2、自身免疫性疾病;

3、感染性疾病;

4、器官、骨髓移植;

5、抗體開(kāi)發(fā)。


案例展示


1、肝癌免疫微環(huán)境

2017 年,北京大學(xué)張澤民教授課題組通過(guò)大規(guī)模單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)對(duì)肝癌相關(guān) T 淋巴細(xì)胞進(jìn)行了分析,在單細(xì)胞水平上描繪肝癌微環(huán)境中免疫圖譜。研究者收集了 6 例肝癌患者的外周血,癌旁正常組織、肝癌組織作為實(shí)驗(yàn)樣本,然后從各類樣本中用流式分選出 CD3+CD8+(cytotoxic T cells,Tc)細(xì)胞,以及 CD4+CD25-(Helper T cells,Th)細(xì)胞和 CD4+CD25+(regulatory?T cells,Tregs)細(xì)胞,并進(jìn)行了單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序和單細(xì)胞 TCR 測(cè)序,總共獲得 5063 個(gè)單細(xì)胞的數(shù)據(jù)。其中,單細(xì)胞水平分析 TCR 序列發(fā)現(xiàn),在腫瘤侵潤(rùn)的 exhausted T 細(xì)胞和 Tregs 細(xì)胞中,觀察到 TCRs 發(fā)生了重復(fù)使用。在腫瘤組織中含有相同 TCR 的 T 細(xì)胞比例較高,而在外周血和正常組織中比例較低,這說(shuō)明在腫瘤中的 exhausted T 細(xì)胞和 Tregs 細(xì)胞發(fā)生了克隆擴(kuò)增。并且相比于早期病人,晚期病人中 T 細(xì)胞的克隆擴(kuò)增更加明 顯。

肝癌免疫微環(huán)境圖

圖 肝癌中 T 細(xì)胞的克隆擴(kuò)增

?

2、黑色素瘤免疫微環(huán)境

2019 年發(fā)表在 Cell 上發(fā)表的一篇論文,對(duì) 25 個(gè)黑色素瘤患者腫瘤中總共 46,621 個(gè)免疫細(xì)胞進(jìn)行了單細(xì)胞 RNA 和 TCR 測(cè)序。這些細(xì)胞被分成 7 個(gè)大群,包括 T 細(xì)胞(CD3),NK 細(xì)胞(KLRD1),樹(shù)突細(xì)胞(DCs;CD1C),巨噬細(xì)胞(C1Q),單核細(xì)胞(VCAN),B 細(xì)胞(CD19),和漿細(xì)胞(immunoglobulins)。初始 T 細(xì)胞高表達(dá) IL7R, CCR7 和轉(zhuǎn)錄因子 TCF7,特異性表達(dá)的基因整體來(lái)說(shuō)比其它類型的細(xì)胞少。而非初始 T 細(xì)胞具有很高的異質(zhì)性,其中一小群是記憶 T 細(xì)胞,大部分細(xì)胞是過(guò)渡性 CD8 T 細(xì)胞(transitional CD8 effector T),細(xì)胞毒性 CD8 T 細(xì)胞(cytotoxic CD8 effector T)和喪失功能的 CD8 T 細(xì)胞(dysfunctional CD8 T cells),高表達(dá) PD- 1 和 LAG3。這些細(xì)胞類群的邊界是模糊的,提示轉(zhuǎn)錄的梯度表達(dá)是造成 T 細(xì)胞異質(zhì)性的原因。CD4 T 細(xì)胞主要有高表達(dá) FOXP3 的 Treg,濾泡輔助 T 細(xì)胞(CXCL13 表達(dá)),以及一小群高表達(dá)免疫檢查點(diǎn)分子的細(xì)胞(dysfunctional CD4 T cells)。分析每名患者的免疫細(xì)胞組成,發(fā)現(xiàn)大部分 T 細(xì)胞類群在患者中都存在,但是病人之間不同細(xì)胞類群的豐度有很大差異。喪失功能的 CD8 T 細(xì)胞的負(fù)荷可能是黑色素瘤本質(zhì)的特征。

病人間免疫微環(huán)境異質(zhì)性

圖 病人間免疫微環(huán)境異質(zhì)性

通過(guò)分析 T 細(xì)胞的 TCR 序列,發(fā)現(xiàn)不同病人的 TCR 克隆型構(gòu)成差異較大。一些大的克隆中細(xì)胞類型也不同,主要表現(xiàn)為喪失功能的 CD8 T 細(xì)胞的富集和初始 T 細(xì)胞的缺失?;颊咧袉适Чδ艿?CD8 T 細(xì)胞的比例與 T 細(xì)胞的擴(kuò)增程度呈現(xiàn)正相關(guān)。通過(guò)計(jì)算每個(gè)細(xì)胞的增殖分?jǐn)?shù),發(fā)現(xiàn)喪失功能的 CD8 T 細(xì)胞有高增殖細(xì)胞比例,比初始 T 細(xì)胞高出 10 倍。

圖 黑色素瘤中 T 細(xì)胞的克隆擴(kuò)增

圖 黑色素瘤中 T 細(xì)胞的克隆擴(kuò)增


3、免疫治療

靶向 PD-1/PD-L1 通路的免疫檢查點(diǎn)抑制劑的出現(xiàn),給癌癥的臨床治療帶來(lái)了革命性的變化。然而 人們對(duì) PD-1 抗體的抑癌機(jī)制并不了解。其中一個(gè)關(guān)鍵的問(wèn)題是 PD- 1 抗體的抑癌效果,究竟是依賴于在治療前就存在于腫瘤中的浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞的再激 活,還是治療之后,腫瘤外的殺傷 T 細(xì)胞進(jìn)入腫瘤?這個(gè)問(wèn)題,目前也是不清楚的。來(lái)自斯坦福大學(xué)醫(yī)學(xué)院的研究團(tuán)隊(duì),從接受 PD- 1 抗體治療前后的基底細(xì)胞癌(BCC)或鱗狀細(xì)胞癌(SCC)患者身上采集了 79046 個(gè)細(xì)胞(包括癌細(xì)胞和各種免疫細(xì)胞),進(jìn)行了單細(xì)胞 RNA 測(cè)序和 TCR 測(cè)序?;趩渭?xì)胞 RNA 測(cè)序結(jié)果,細(xì)胞分成 19 個(gè)亞群。

本研究的重點(diǎn)是免疫細(xì)胞,尤其是浸潤(rùn)性免疫細(xì)胞,以及治療前后的變化,以了解克隆性 T 細(xì)胞對(duì) PD- 1 抗體治療的反應(yīng)。因此研究人員把所有的 33106 個(gè)腫瘤浸潤(rùn)性 T 細(xì)胞做了個(gè)更細(xì)致的分類,包括表達(dá) CD4 的調(diào)節(jié)性 T 細(xì)胞(Treg)細(xì)胞,濾泡輔助性 T(TFH)細(xì)胞,T 輔助細(xì)胞 17(TH17)細(xì)胞;以及表達(dá) CD8 的幼稚細(xì)胞,記憶 T 細(xì)胞,效應(yīng)記憶 T 細(xì)胞,活化 T 細(xì)胞,慢性活化 / 耗竭 T 細(xì)胞,中度耗竭 / 活化細(xì)胞。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn),在 PD- 1 抗體治療之后,濾泡輔助性 T 細(xì)胞,以及活化,耗竭和耗竭 / 活化的 CD8 陽(yáng)性 T 細(xì)胞的頻率增加,并且耗竭 T 細(xì)胞的克隆水平明 顯更高。更為讓研究人員感到意外的是,對(duì)于同一個(gè)患者而言,治療后記憶 T 細(xì)胞和效應(yīng) T 細(xì)胞頻繁轉(zhuǎn)換為活化狀態(tài),但是治療前的耗竭 T 細(xì)胞卻沒(méi)有變成治療后的非耗竭表型。這表明,即使在 PD- 1 抗體治療后,已經(jīng)耗竭的腫瘤浸潤(rùn) T 細(xì)胞也很難變成活化狀態(tài)了。

圖 治療前后 T 細(xì)胞的狀態(tài)轉(zhuǎn)換

圖 治療前后 T 細(xì)胞的狀態(tài)轉(zhuǎn)換。

此外,研究人員還觀察到一個(gè)有趣的現(xiàn)象,PD- 1 抗體治療后才出現(xiàn)的耗竭性 T 細(xì)胞表現(xiàn)出了新的 TCR 特異性。為了分析外周血中是否存在新發(fā)現(xiàn)的腫瘤浸潤(rùn)性 T 細(xì)胞,研究人員給患者的血液樣品做了 TCR 測(cè)序,發(fā)現(xiàn) 35.5% 新腫瘤浸潤(rùn)性 T 細(xì)胞可以在 PD- 1 抗體治療后的外周血中找到,而在治療前的外周血中只能找到 11.8% 的新腫瘤浸潤(rùn)性 T 細(xì)胞,不過(guò)治療前的腫瘤里面卻沒(méi)有新腫瘤浸潤(rùn)性 T 細(xì)胞。

圖 新發(fā)現(xiàn)的腫瘤浸潤(rùn)性 T 細(xì)胞在外周血中的比例

圖 新發(fā)現(xiàn)的腫瘤浸潤(rùn)性 T 細(xì)胞在外周血中的比例

總的來(lái)說(shuō),與“冷”腫瘤相比,“熱”腫瘤之所以響應(yīng) PD- 1 抗體的治療,可能是由于“熱”腫瘤自身的特性,讓它能夠不斷吸引新 T 細(xì)胞進(jìn)入,而不是重新激活已有的腫瘤浸潤(rùn)性 T 細(xì)胞。這項(xiàng)研究讓我們對(duì)免疫檢查點(diǎn)抑制劑的作用機(jī)制有了新的認(rèn)知,這對(duì)臨床治療和療效的檢測(cè)都有一定的價(jià)值和意義。



電子資料

序號(hào) 文件類型 查閱
1 【畫冊(cè)】單細(xì)胞全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄本測(cè)序解決方案 點(diǎn)擊查看
2 【畫冊(cè)】石蠟樣本(FFPE)單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序解決方案 點(diǎn)擊查看
3 【畫冊(cè)】單細(xì)胞測(cè)序解決方案 點(diǎn)擊查看


返回頂部
主站蜘蛛池模板: 国产V在线在线观看视频_色综合久久中文字幕有码_人妻无码久久精品人妻_91在线伊人观看视频_国产美女A做受大片观看_欧美成人不卡 一级视频网_92少妇精品免费视频_精彩久久_四虎影院中文字幕_久久久久成人免费视频_美女网站久久 | 国产无在线观看_红杏导航_日本一区二区三区dvd视频在线_欧美videossex精品_性欧美激情日韩精品七区_性感毛片 | 综合婷婷色_潘金莲aa毛片一区二区_成年人的午夜视频_亚洲一级高清_国产精品久久久久久久久鸭无码_久久亚洲一区 | 午夜二区_欧美成人a∨高清免费观看_国语自产免费精品视频在_人摸人人人澡人人超碰97_超碰免费在线公开_a级毛片视频免费观看 | 黄色影视在线免费观看_噗嗤噗嗤高清在线视频www_2020最新久久久视精品爱_开心激情站_精品少妇人妻av无码专区_久久午夜伦理 | 久热精品免费_日韩av福利_欧美午夜片欧美片在线观看_天天操夜夜操夜夜操_无码中文字幕人妻在线一区_一区二区三区免费看 | 99国产精品九九视频免费看_中国一级毛片儿_国产色情乱码久久久久一区二区_琪琪午夜成人理论福利片_黄p视频在线免费观看_野花日本大全免费观看2019 | 久久精品中文字幕一区_69视频播放_gogogo高清在线观看中国_在线二区三区_高清重口变态sm在线观看_91免费观看视频 | 国产V在线在线观看视频_色综合久久中文字幕有码_人妻无码久久精品人妻_91在线伊人观看视频_国产美女A做受大片观看_欧美成人不卡 一级视频网_92少妇精品免费视频_精彩久久_四虎影院中文字幕_久久久久成人免费视频_美女网站久久 | 欧美不在线_午夜福利不卡在线视频_香蕉久久国产_斗苍穹年番观看免费完整观看_欧美性受xxxx黑人_超碰97人人做人人爱网站 | 深夜免费_亚洲精品无码久久天堂_国产精彩视频一区二区三区_日本久久中文字幕_精品美女在线观看_52久久 欧美一区2区三区4区公司_玖玖综合网_鲁鲁网亚洲站内射污_一级黄色av片_亚洲熟妇丰满多毛XXXX_中文无码一区二区三区在线观看 | 99久久精品免费看国产交换_天天干视频_老湿午夜免费yin22.xyz_网红av在线_福利视频入口_免费一区二区三区视频在线 | 91国精品人一区二区三区_日本黄色网站在线观看_欧洲s码亚洲m码精品一区_黄色免费网站观看_国产精品久久久久久久泡妞_国产精品美女久久久亚洲 | 好属妞这里只有精品_人妻校园激情另类_国产成人精品日本亚洲77上位_国产成人小视频在线观看_在线免费精品视频_激情视频日本 | 男女黄色一级片_好吊妞这里只有精品_免费淫片aaaa级_高清不卡一区二区三区香蕉_五月天sese_美女视频黄频大全不卡视频在线播放 | 亚洲精品国产品国语在线_国产在线无码视频观看草草视频_在线天堂官网_美女毛片_在线永久看片免费的视频_中文日韩在线观看 | 午夜在线成人_人人干日日干_9色视频在线_亚洲黄色精品视频_亚洲欧美综合自拍_国产91在线观看网站 | 亚洲国产精品一区二区第四页av_亚洲国产激情_av今日在线_成人三级视频在线观看一区二区_最近韩国日本免费观看mv百度_av蜜桃在线 | www视频在线_人妖干美女_亚洲第五色综合网_男人天堂视频在线_久久精品亚洲一级毛片_999zyz玖玖资源站一区二区 | 久久精品国产亚洲夜色av网站_先锋影音中文字幕_天天干天天操天天爱_四虎在线视频观看_在线中文字幕亚洲_HEYZO无码中文字幕人妻 | 狠狠穞www老司机的福利_狼人大香伊蕉在人线国产_国产精品色欲AV蜜臀麻豆_最近日本中文字幕_超碰9999_少妇人体色www网站 | 中文字幕人成乱码在线观看_曰本a级毛片在线观看_看全色黄大色大片免费无码_а的天堂网最新版在线_99久久综合99久久综合网站_欧美一区二区三区在线视频 | 免费无码黄动漫在线观看尤物_亚洲综合不卡_777久久久免费精品国产_欧洲免费在线视频_国产亚洲精品v_日本免费影院 | 欧美性孟交_日韩欧美国产视频一区_亚洲成人第一_在线看黄色av_免费的一级视频_一二三四视频在线观看中文版免费 | 国产精品对白交换绿帽视频_av中文在线观看_色偷偷综合网_黄色av网址在线观看_欧美黑人体内she精在线观看_久久福利国产 | 九热视频_国产日韩一区二区三_亚洲欧美999_久久久综合_日日夜日日干_性爱免费在线视频 | 欧美xxx片_免费av网站在线播放_免费看一级黄色大片_成人黄页网站视频_奇米777四色影色在线看_色一情一区二区三区四区 | 这里只有久久精品_超碰最新网址_日韩成人在线观看_国产AV人人夜夜澡人人爽_国农村精品国产自线拍_五月婷六月丁香狠狠躁狠狠爱 | 91porny丨首页入口在线_久久毛毛片_国产日产一区二区三区久久久久久_正在播放一区_久久高清一区二区_久久精品国产亚洲AV无码麻豆 | 国产亚洲成人精品_HEYZO中文字幕无码_免费黄禁片_婷婷中文字幕一区_午夜蜜汁一区二区三区av_国产又粗又硬又大爽黄老大爷视频 | 午夜影院性生活_成人小视频在线免费观看_亚洲精品一线_99久久免费观看_七龙珠z普通话国语版在线观看_AV不卡秒播在线观看 | 色情推油按摩G点高潮无码视频_久久精品中文字幕大胸_一二三四日本视频中文_欧美在线影院_亚洲一在线_欧美a级毛片免费播敢 | 精品国产免费久久_男人天堂一区_国产一级黄片毛片_久久超碰网_久久久久久亚洲国产_亚洲伊人色欲综合网色 | 国产乱淫a∨片免费观看_精品一区二区三区免费播放_国产91美女视频_久久精品噜噜噜成人av农村_国产小屁孩cao大人_一级毛片在线看aaaa | 九九视频网_久久国产日本_男人的天堂色欲网HTTP_亚洲大尺度专区无码浪潮AV_亚洲欧美日韩国产综合一区二区_欧美日韩视频无码一区二区三 | 好紧好湿好硬国产在线视频_亚洲AV无码一区二区三区人_看视频免费网址_久久久久网站_极品美女大尺度私房写真_福利一区二区三区视频在线观看 | 欧美在线视频a_国产无遮挡裸体免费视频在线观看_中文字幕1区_老师你怎么会在这第2季在线观看_67194成是人免费无码_最近免费中文mv在线字幕 | 久久免费观看午夜成人网站_国产高清一区二区_久久久网站免费_99re久久精品国产_国产色网_久久99精品久久久久久不卡 | 日本久久黄色_无码AV中文字幕久久专区_日本精品啪啪一区二区三区_青青草自拍偷拍视频_美女视频久久黄_日www | 日韩黄在线观看_成人在线_亚洲欧洲一二区_国产资源中文字幕_美腿制服丝袜国产亚洲_中日韩av在线 | 精品国产乱码久久久久久竹菊影视_国产高清三区_免费看一级片_69视频免费_91精彩在线_亚洲伊人精品综合在合线 |